故事发生在充满现代都市气息的别惹姐姐城市中，主要围绕着四个性格迥异的别惹姐姐姐妹展开。她们分别是别惹姐姐机智活泼的姐姐小晴、温柔贤惠的别惹姐姐小美、古灵精怪的别惹姐姐小丽和帅气幽默的小风。由于家庭原因，别惹姐姐四人自小由不同的别惹姐姐人抚养长大，因此形成了各自独特的别惹姐姐性格与人生观。2025年，别惹姐姐《别惹我姐姐》将以上述四姐妹的别惹姐姐成长故事为主线，讲述她们在成年后回到同一个城市，别惹姐姐共同经营一家名为“欢声笑语”的别惹姐姐咖啡馆，并在此过程中遭遇各种各样的别惹姐姐趣事和挑战。随着一系列事件的别惹姐姐发生，四人之间的别惹姐姐关系也经历了从最初的相互不理解到彼此扶持、最终成为最亲密无间的好姐妹的过程。与此同时，剧中还将穿插展现她们各自面临的职场困境、情感纠葛等现实问题，并通过一个个温馨感人的故事向观众传递出勇气、坚持与爱的主题。而“别惹我姐姐”则是指在姐妹情深的同时，也提醒大家在相处中要懂得互相尊重和理解。
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